Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLA2R: sc-411636-ACT

PLA2R1 code pour le récepteur de la phospholipase A2 (PLA2R), un membre de la famille des lectines de type C, protéine transmembranaire de type I, qui se lie aux phospholipases A2 sécrétées ainsi qu’à d’autres ligands afin de réguler leur captation cellulaire, leur localisation et la signalisation en aval. Par l’endocytose médiée par le récepteur et la modulation de la disponibilité extracellulaire des médiateurs lipidiques, PLA2R peut influencer la signalisation inflammatoire, les réponses au stress oxydatif et les interactions cellule–matrice. En biologie rénale, PLA2R est exprimé dans les podocytes et est largement étudié dans le contexte de la néphropathie membraneuse auto-immune, où la réactivité immunitaire associée à PLA2R et des modifications de la dynamique du récepteur sont liées aux lésions glomérulaires. Plus largement, PLA2R1 a été étudié dans des voies contrôlant la survie cellulaire, des programmes associés à la sénescence et le remodelage tissulaire, ce qui étaye sa pertinence dans des phénotypes liés à l’inflammation et à la fibrose.

PLA2R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLA2R1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLA2R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLA2R1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLA2R1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLA2R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLA2R1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLA2R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLA2R dans les cellules tumorales présentant une expression de PLA2R1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.