pki γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411573

Panoramica

PKIG codifica la protein chinasi inibitore gamma (PKIγ), un inibitore endogeno della proteina chinasi A (PKA) dipendente da cAMP che contribuisce a limitare la segnalazione basale e quella indotta da stimoli mediata da PKA. Legandosi alla subunità catalitica della PKA, PKIγ modula il controllo, dipendente dalla fosforilazione, della trascrizione, del metabolismo, della progressione del ciclo cellulare e della dinamica del citoscheletro a valle delle vie GPCR–adenilil ciclasi–cAMP. L’attività di PKIG si interseca con l’espressione genica regolata da CREB e con reti più ampie di segnalazione chinasi che plasmano le risposte cellulari allo stress e i programmi di differenziamento. Una segnalazione cAMP/PKA deregolata è stata implicata in molteplici processi rilevanti per la malattia, inclusi la crescita delle cellule tumorali, anomalie della segnalazione endocrina e la funzione neuronale, rendendo PKIG un nodo utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO pki γ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PKIG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PKIG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PKIG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina pki γ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PKIG per lo studio della segnalazione di pki γ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PKIG critici per la funzione di pki γ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PKIG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal pki γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal pki γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PKIG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal pki γ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR pki γ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PKIG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PKIG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.