pki γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411573

Descripción general

PKIG codifica el inhibidor gamma de la proteína quinasa (PKIγ), un inhibidor endógeno de la proteína quinasa A (PKA) dependiente de AMPc que ayuda a restringir la señalización basal y la inducida por estímulos de PKA. Al unirse a la subunidad catalítica de PKA, PKIγ modula el control dependiente de la fosforilación de la transcripción, el metabolismo, la progresión del ciclo celular y la dinámica del citoesqueleto aguas abajo de las vías GPCR–adenilil ciclasa–AMPc. La actividad de PKIG converge con la expresión génica regulada por CREB y con redes más amplias de señalización de quinasas que configuran las respuestas celulares al estrés y los programas de diferenciación. La desregulación de la señalización AMPc/PKA se ha implicado en múltiples procesos relevantes para la enfermedad, como el crecimiento de células tumorales, alteraciones de la señalización endocrina y la función neuronal, lo que convierte a PKIG en un nodo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO pki γ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PKIG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PKIG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PKIG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína pki γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PKIG para la investigación de la señalización de pki γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PKIG críticos para la función de pki γ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PKIG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido pki γ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido pki γ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PKIG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR pki γ (h) y el plásmido HDR pki γ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PKIG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PKIG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.