pki α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416391

Panoramica

PKIA codifica l’inibitore alfa della protein chinasi (PKIα), un inibitore termostabile che si lega alla subunità catalitica della protein chinasi A (PKA) dipendente da cAMP e ne sopprime l’attività chinasica. Limitando la segnalazione cAMP/PKA, PKIα influenza i programmi di fosforilazione che controllano la regolazione trascrizionale, la progressione del ciclo cellulare, il metabolismo e le risposte allo stress, inclusa la modulazione dell’espressione genica dipendente da CREB. PKIα contribuisce inoltre al controllo spaziale della segnalazione di PKA tramite interazioni che influenzano la localizzazione della chinasi e l’ampiezza del segnale. Un’attività deregolata della via cAMP/PKA e un’espressione alterata di PKIA sono state associate a contesti rilevanti per la biologia tumorale, la segnalazione endocrina e la funzione neuronale, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici centrati sulle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO pki α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PKIA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PKIA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PKIA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina pki α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PKIA per lo studio della segnalazione di pki α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PKIA critici per la funzione di pki α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PKIA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal pki α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal pki α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PKIA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal pki α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR pki α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PKIA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PKIA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.