Plásmido CRISPR de Activación (h) PKA IIβ reg: sc-402536-ACT

PRKAR2B codifica la subunidad reguladora IIβ de la proteína quinasa A (PKA) dependiente de AMPc, un modulador clave de la actividad de las subunidades catalíticas y de la localización subcelular en respuesta al AMPc. Mediante una señalización compartimentalizada, a menudo coordinada por las proteínas de anclaje de la A-quinasa (AKAP), PRKAR2B ayuda a configurar la dinámica de fosforilación que influye en el metabolismo, la organización del citoesqueleto, los programas transcripcionales y la señalización sináptica. Las vías dependientes de PKA se entrecruzan con la señalización de GPCR, la regulación génica mediada por CREB y redes sensibles al estrés que controlan la proliferación y la diferenciación celulares. La bibliografía ha vinculado la desregulación de la señalización AMPc/PKA en la que participa PRKAR2B con fenotipos metabólicos alterados y procesos neuroconductuales, lo que respalda su relevancia para estudiar la integración de señales en contextos asociados a enfermedades.

PKA IIβ reg El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKAR2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PKA IIβ reg El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKAR2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKAR2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PKA IIβ reg. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKAR2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PKA IIβ reg en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PKA IIβ reg en células tumorales con expresión de PRKAR2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.