Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) PKAα cat: sc-400262-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PKAα cat consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PKAα cat (h) y el plásmido de doble nickasa PKAα cat (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRKACA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PKAα cat Anticuerpo (A-2): sc-28315
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PKAα cat | sc-400262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PKAα cat | sc-400262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKACA codifica la subunidad catalítica alfa de la proteína quinasa A dependiente de AMPc (PKAα), un efector central de la señalización GPCR–adenilil ciclasa que fosforila diversos sustratos que controlan el metabolismo, la actividad de los canales iónicos, la transcripción y la progresión del ciclo celular. PKAα regula la expresión génica dependiente de CREB y se integra con nodos de las vías MAPK, calcio y AKT para moldear respuestas celulares específicas del contexto. La actividad aberrante de PRKACA se asocia con una señalización de AMPc desregulada y se ha implicado en la biología tumoral endocrina y hepática, la hiperfunción suprarrenal y programas de diferenciación alterados. Como quinasa central dentro del eje AMPc/PKA, PRKACA se estudia ampliamente en transducción de señales, respuestas al estrés y mapeo de redes fosfoproteómicas.
PKAα cat El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKACA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKACA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKACA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKACA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.