Plásmido Doble Nickase (h) PIWIL2: sc-402211-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PIWIL2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PIWIL2 (h) y el plásmido de doble nickasa PIWIL2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PIWIL2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PIWIL2 | sc-402211-NIC | 20 µg | $410.00 |
PIWIL2 (PIWI-like RNA-mediated gene silencing 2) es una proteína Argonauta de la subfamilia PIWI que se une a piARN para regular la estabilidad del ARN y los estados epigenéticos, con funciones destacadas en el desarrollo de la línea germinal y el mantenimiento de la integridad del genoma. Participa en la represión de transposones mediada por la vía de los piARN, el silenciamiento génico posranscripcional y la regulación asociada a la cromatina, limitando así la movilización de elementos transponibles y el daño al ADN. Se ha descrito una expresión aberrante de PIWIL2 en múltiples contextos tumorales y con frecuencia se estudia en relación con programas de tipo célula madre, alteraciones del control del ciclo celular y redes desreguladas de ARN pequeños. Por lo tanto, PIWIL2 es relevante para investigar mecanismos de silenciamiento guiados por ARN, regulación epigenética y vías de vigilancia del genoma en células humanas.
PIWIL2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIWIL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIWIL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIWIL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIWIL2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.