Pitx2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401426-LAC

PITX2 kodiert den paired-like Homeodomänen-Transkriptionsfaktor Pitx2, einen zentralen Regulator der embryonalen Musterbildung und Organogenese, der zur Festlegung der Links-Rechts-Asymmetrie beiträgt und die Entwicklung von Herz, Auge, kraniofazialen Strukturen und Skelettmuskulatur koordiniert. Pitx2 integriert vorgelagerte Signale aus den Wnt/β-Catenin-, TGF-β/Nodal- und Retinsäure-Signalwegen, um linien-/zelltypspezifische transkriptionelle Programme, zelluläre Differenzierung und Gewebemorphogenese zu steuern. Eine fehlregulierte PITX2-Aktivität wurde mit angeborenen Fehlbildungen in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten wie der Entwicklung des Vorhofs und der Anfälligkeit für Arrhythmien, der vorderen Segmentdysgenesie sowie kraniofazialen Phänotypen untersucht. In der Krebsbiologie wurden PITX2-Expression und epigenetische Regulation im Hinblick auf Rollen bei Zustandsübergängen von Tumorzellen, invasionsassoziierten Transkriptionsnetzwerken und dem Crosstalk zwischen Signalwegen untersucht.

Pitx2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PITX2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pitx2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PITX2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pitx2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PITX2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.