Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PITSLRE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419583
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PITSLRE El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PITSLRE, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PITSLRE Anticuerpo (B-9): sc-377296
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PITSLRE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419583 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El Cdk11b de ratón codifica la quinasa de serina/treonina PITSLRE, un miembro de la familia de quinasas dependientes de ciclina implicado en coordinar la progresión del ciclo celular con programas de transcripción y de procesamiento de ARN. La actividad de PITSLRE se ha vinculado con la regulación del empalme del pre-ARNm, el control mitótico y la apoptosis, contribuyendo a la proteostasis y a la integridad del genoma en células en proliferación. La alteración de las vías asociadas a PITSLRE puede modificar las respuestas de los puntos de control y la señalización de estrés, procesos que se estudian con frecuencia en modelos de proliferación desregulada y de homeostasis tisular. Como nodo que conecta la señalización por quinasas con la maquinaria nuclear de expresión génica, Cdk11b es relevante para investigaciones mecanísticas del control del crecimiento y de fenotipos celulares asociados a enfermedad en sistemas murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PITSLRE (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cdk11b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cdk11b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cdk11b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PITSLRE.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cdk11b para la investigación de la señalización de PITSLRE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cdk11b críticos para la función de PITSLRE
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cdk11b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PITSLRE CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PITSLRE CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cdk11b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PITSLRE (m) y el plásmido HDR PITSLRE (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cdk11b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cdk11b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.