PITSLRE B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402477-ACT

CDK11A codifica a quinase dependente de ciclina PITSLRE B, uma quinase de serina/treonina implicada na coordenação da progressão do ciclo celular com o processamento de RNA e o controlo transcricional. A PITSLRE B tem sido associada à regulação do splicing de pré‑mRNA, a eventos mitóticos e à sinalização responsiva ao stress, em linha com funções na manutenção da homeostase proliferativa. Como regulador da família das CDKs, alterações na atividade de CDK11A podem influenciar vias que governam o controlo de checkpoints, a apoptose e programas de expressão génica que frequentemente se encontram desregulados no cancro e noutros distúrbios proliferativos. Estas propriedades tornam CDK11A/PITSLRE B um alvo útil para investigar mecanismos de divisão celular, o acoplamento transcrição–splicing e fenótipos de viabilidade dependentes do contexto em modelos celulares humanos.

PITSLRE B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK11A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PITSLRE B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK11A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK11A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PITSLRE B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK11A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PITSLRE B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PITSLRE B em células tumorais com expressão de CDK11A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.