Plásmido CRISPR de Activación (h) PITSLRE B: sc-402477-ACT

CDK11A codifica la quinasa dependiente de ciclina PITSLRE B, una quinasa de serina/treonina implicada en coordinar la progresión del ciclo celular con el procesamiento de ARN y el control transcripcional. PITSLRE B se ha vinculado con la regulación del empalme (splicing) del pre-ARNm, eventos mitóticos y la señalización sensible al estrés, en consonancia con funciones en el mantenimiento de la homeostasis proliferativa. Como regulador de la familia de las CDK, la actividad alterada de CDK11A puede influir en vías que gobiernan el control de puntos de control (checkpoints), la apoptosis y programas de expresión génica que con frecuencia están desregulados en el cáncer y otros trastornos proliferativos. Estas propiedades hacen de CDK11A/PITSLRE B una diana útil para investigar mecanismos de división celular, el acoplamiento transcripción–splicing y fenotipos de viabilidad dependientes del contexto en modelos celulares humanos.

PITSLRE B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK11A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PITSLRE B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK11A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK11A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PITSLRE B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK11A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PITSLRE B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PITSLRE B en células tumorales con expresión de CDK11A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.