PITSLRE A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402476

Descripción general

CDK11B codifica la quinasa dependiente de ciclina PITSLRE A, una proteína quinasa de serina/treonina implicada en coordinar la progresión del ciclo celular con el control transcripcional. PITSLRE A se ha relacionado con la regulación del procesamiento de ARN y el empalme (splicing) del pre-ARNm mediante interacciones con factores asociados a la transcripción y al espliceosoma, lo que sustenta programas de expresión génica necesarios para la proliferación. En células humanas en proliferación, la actividad de la familia CDK11 se estudia con frecuencia en el contexto del control mitótico, las respuestas al estrés y el mantenimiento de la proteostasis. Se ha observado desregulación de redes asociadas a CDK11 en múltiples contextos relevantes para enfermedades, en los que las alteraciones del ciclo celular y del metabolismo del ARN contribuyen a fenotipos patológicos, lo que convierte a CDK11B en un nodo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PITSLRE A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDK11B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDK11B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDK11B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PITSLRE A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDK11B para la investigación de la señalización de PITSLRE A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDK11B críticos para la función de PITSLRE A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDK11B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PITSLRE A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PITSLRE A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDK11B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PITSLRE A (h) y el plásmido HDR PITSLRE A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDK11B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDK11B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.