PITSLRE A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402476

Übersicht

CDK11B kodiert die cyclinabhängige Kinase PITSLRE A, eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die an der Koordination des Zellzyklusfortschritts mit der transkriptionellen Kontrolle beteiligt ist. PITSLRE A wird über Interaktionen mit Transkriptions- und Spleißosom-assoziierten Faktoren mit der Regulation der RNA-Verarbeitung und des prä-mRNA-Spleißens in Verbindung gebracht und unterstützt damit Genexpressionsprogramme, die für die Proliferation erforderlich sind. In proliferierenden humanen Zellen wird die Aktivität der CDK11-Familie häufig im Kontext der mitotischen Kontrolle, von Stressantworten und der Aufrechterhaltung der Proteostase untersucht. Eine Fehlregulation CDK11-assoziierter Netzwerke wurde in mehreren krankheitsrelevanten Situationen beobachtet, in denen veränderte Zellzyklus- und RNA-Stoffwechselprozesse zu pathologischen Phänotypen beitragen, was CDK11B zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.

Das PITSLRE A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDK11B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDK11B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDK11B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PITSLRE A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDK11B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PITSLRE A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDK11B-Exone abzielen, die für die PITSLRE A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDK11B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PITSLRE A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PITSLRE A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDK11B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PITSLRE A HDR-Plasmid (h) und PITSLRE A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDK11B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDK11B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.