PiT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403121

Descripción general

SLC20A1 codifica PiT1, un cotransportador simporte de fosfato dependiente de sodio de tipo III, expresado de manera ubicua, que regula la captación de fosfato inorgánico para sostener la síntesis de nucleótidos, la producción de fosfolípidos de membrana y la bioenergética celular. PiT1 influye en redes de señalización vinculadas a la homeostasis del fosfato, incluidas ERK/MAPK y el control del ciclo celular, y participa en la diferenciación osteogénica y los procesos de mineralización a través de programas transcripcionales sensibles al fosfato. La actividad alterada de SLC20A1 se ha asociado con una proliferación y respuestas al estrés desreguladas, y se estudia con frecuencia en el contexto de la calcificación vascular, la remodelación metabólica y la biología tumoral, donde la disponibilidad de fosfato puede moldear fenotipos de crecimiento y supervivencia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PiT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC20A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC20A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC20A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PiT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC20A1 para la investigación de la señalización de PiT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC20A1 críticos para la función de PiT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC20A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PiT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PiT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC20A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PiT1 (h) y el plásmido HDR PiT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC20A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC20A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.