PISD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404398
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PISD El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PISD, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PISD Anticuerpo (H-2): sc-390070
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PISD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404398 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PISD codifica la fosfatidilserina descarboxilasa, una enzima de la membrana interna mitocondrial que convierte la fosfatidilserina en fosfatidiletanolamina, apoyando la biogénesis de membranas, la arquitectura de las crestas y la homeostasis del orgánulo. Al controlar el pool de PE, PISD influye en la remodelación lipídica, la dinámica mitocondrial y procesos vinculados a la fosforilación oxidativa y la apoptosis. La alteración del metabolismo de fosfolípidos dependiente de PISD se ha relacionado con defectos en la función mitocondrial y con respuestas más amplias de estrés celular, lo que la hace relevante para estudios de fenotipos neuromusculares y metabólicos. Su papel central en la biosíntesis de lípidos mitocondriales también se entrecruza con vías que regulan la autofagia y el tráfico de lípidos entre el RE y la mitocondria.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PISD (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PISD en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PISD junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PISD tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PISD.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PISD para la investigación de la señalización de PISD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PISD críticos para la función de PISD
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PISD para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PISD CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PISD CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PISD. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PISD (h) y el plásmido HDR PISD (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PISD para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PISD definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.