Plasmide CRISPR d'Activation (m) PISD: sc-435844-ACT

La PISD (phosphatidylsérine décarboxylase) de la souris est une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui catalyse la conversion de la phosphatidylsérine en phosphatidyléthanolamine, une étape clé du remodelage des phospholipides requis pour la biogenèse des membranes et la dynamique des organites. En modulant la disponibilité de la phosphatidyléthanolamine, la PISD soutient la morphologie mitochondriale, les performances de la phosphorylation oxydative, ainsi que des processus liés à la signalisation dépendante des lipides et à l’autophagie. La perturbation de l’homéostasie lipidique liée à la PISD est pertinente pour l’étude des réponses au stress mitochondrial et de l’adaptation métabolique, et a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuromusculaires dans des contextes de maladies génétiques. En conséquence, Pisd est fréquemment étudié dans des voies régissant la fonction mitochondriale, le trafic membranaire et la fitness cellulaire déterminée par le métabolisme lipidique.

PISD Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pisd sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PISD Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pisd dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pisd, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PISD. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pisd natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PISD au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PISD dans les cellules tumorales présentant une expression de Pisd silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.