PIPK I α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422243

Panoramica

Pip5k1a del topo codifica la fosfatidilinositolo-4-fosfato 5-chinasi di tipo I alfa (PIPK I α), una chinasi lipidica che genera fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) a livello della membrana plasmatica e dei compartimenti endomembranosi. Il PI(4,5)P2 sostiene la segnalazione dipendente dai fosfoinositidi e organizza la dinamica del citoscheletro di actina, il turnover delle adesioni focali e il traffico di membrana, influenzando così la migrazione cellulare, la citocinesi e la trasduzione del segnale guidata dai recettori. Attraverso l’accoppiamento alla produzione di secondi messaggeri mediata da PLC e la regolazione dell’asse PI3K, PIPK I α contribuisce a modulare i pathway che controllano proliferazione e sopravvivenza. Un metabolismo dei fosfoinositidi deregolato e il rimodellamento del citoscheletro dipendente da PI(4,5)P2 sono implicati nella biologia del cancro, nella funzione delle cellule immunitarie e nei processi neurologici, rendendo Pip5k1a un nodo utile per studi meccanicistici su questi fenotipi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pip5k1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pip5k1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pip5k1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIPK I α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pip5k1a per lo studio della segnalazione di PIPK I α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pip5k1a critici per la funzione di PIPK I α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pip5k1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pip5k1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PIPK I α Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PIPK I α (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pip5k1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pip5k1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.