Partículas Lentivirales de Activación (h) Pinin: sc-405373-LAC

PNN codifica pinina, una fosfoproteína multifuncional enriquecida en los desmosomas y en los speckles nucleares, donde favorece la adhesión de las células epiteliales y coordina el procesamiento del pre-ARNm. La pinina contribuye al empalme alternativo y a la exportación de ARNm al interactuar con componentes del espliceosoma y del complejo de unión a exones (EJC), vinculando la integridad de las uniones celulares con los programas de expresión génica. A través de estas funciones, PNN influye en la diferenciación epitelial, la organización del citoesqueleto y las redes transcripcionales sensibles al estrés. La expresión o la localización desreguladas de PNN se han asociado con estados de empalme alterados y con fenotipos relacionados con la transición epitelio-mesenquimal observados en estudios de biología del cáncer y de remodelación tisular.

Las partículas de activación lentiviral Pinin (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PNN en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pinin (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PNN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pinin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PNN y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.