Plásmido Doble Nickase (h) Pin1: sc-400485-NIC

El gen humano **PIN1** codifica Pin1, una isomerasa peptidil‑prolil cis/trans dependiente de fosforilación que reconoce motivos Ser/Thr‑Pro y cataliza cambios conformacionales que controlan la estabilidad, la localización y la salida de señalización de las proteínas. Pin1 integra señales de quinasas dirigidas a prolina y modula vías centrales para la progresión del ciclo celular, la regulación transcripcional, las respuestas al daño en el ADN y la señalización por estrés a través de sustratos como ciclina D1, c‑Myc, p53 y tau. Al remodelar conformaciones de fosfoproteínas, Pin1 influye en el recambio mediado por ubiquitina y en el control de los puntos de control, vinculando la dinámica de la fosforilación con la proteostasis. La actividad desregulada de **PIN1** se ha asociado con programas de señalización oncogénica y procesos neurodegenerativos, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la regulación impulsada por fosforilación.

Pin1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.