PIMT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407101

Descripción general

El TGS1 humano codifica la trimetilguanosina sintasa 1 (PIMT), una metiltransferasa dependiente de SAM que convierte el casquete 2,2,7-trimetilguanosina (TMG) presente en snRNAs y otros pequeños RNAs nucleares. Esta modificación favorece la maduración de las snRNP, su importación al núcleo y la función del espliceosoma, vinculando la actividad de TGS1 con la fidelidad del empalme del pre-ARNm y con redes más amplias de procesamiento de ARN. TGS1 también se relaciona con el control de calidad del ARN y con vías de biogénesis de ribonucleoproteínas que influyen en la proteostasis y las respuestas al estrés. La desregulación del metabolismo del ARN y de programas asociados al empalme implica a TGS1/PIMT en mecanismos relevantes para la neurodegeneración, la biología del cáncer y fenotipos del desarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios centrados en vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PIMT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TGS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TGS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TGS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PIMT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TGS1 para la investigación de la señalización de PIMT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TGS1 críticos para la función de PIMT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TGS1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PIMT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PIMT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TGS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PIMT (h) y el plásmido HDR PIMT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TGS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TGS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.