Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pim-2: sc-401715-ACT

PIM2 code pour Pim-2, une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui intègre les signaux issus des cytokines et des facteurs de croissance afin de favoriser la survie cellulaire, la prolifération et l’adaptation métabolique. Pim-2 phosphoryle des régulateurs de la signalisation et de l’apoptose, soutenant le contrôle de la traduction et la résistance au stress cellulaire, et interagit fonctionnellement avec des programmes associés à JAK/STAT, PI3K/AKT/mTOR et NF-κB. Une expression ou une activité dérégulée de PIM2 a été associée à une altération de l’homéostasie des cellules hématopoïétiques et des réseaux de signalisation oncogéniques, en particulier dans des contextes où les voies de survie sont activées de manière persistante. En tant que modulateur de points de contrôle dépendants de la phosphorylation, Pim-2 est fréquemment étudiée pour ses effets sur l’apoptose, la progression du cycle cellulaire et les phénotypes de réponse aux traitements dans des systèmes modèles.

Pim-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pim-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pim-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pim-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pim-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PIM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.