Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Pim-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422237
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Pim-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Pim-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Pim-1 Anticuerpo (G-11): sc-374116
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Pim-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422237 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pim1 de ratón codifica Pim-1, una cinasa de serina/treonina constitutivamente activa inducida por la señalización de citocinas y factores de crecimiento, e implicada en el control de la proliferación, la supervivencia y la adaptación metabólica. Pim-1 se integra con las salidas de las redes JAK/STAT y PI3K/AKT y modula la progresión del ciclo celular y la apoptosis mediante la fosforilación de efectores aguas abajo que influyen en la transcripción y la estabilidad de las proteínas. En contextos hematopoyéticos e inmunitarios, Pim-1 contribuye al desarrollo y la activación de los linfocitos, y su desregulación se examina con frecuencia en modelos de señalización oncogénica, inflamación y respuestas al estrés. Pim1 también se estudia por sus funciones en la actividad mitocondrial y la senescencia celular, aportando vínculos mecanísticos entre la señalización por cinasas y la homeostasis tisular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pim-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pim1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pim1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pim1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pim-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pim1 para la investigación de la señalización de Pim-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pim1 críticos para la función de Pim-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pim1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Pim-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Pim-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pim1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pim-1 (m) y el plásmido HDR Pim-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pim1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pim1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.