Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pim-1 (m): sc-422237

Présentation

Le gène murin *Pim1* code Pim-1, une kinase sérine/thréonine constitutivement active, induite par la signalisation des cytokines et des facteurs de croissance, et impliquée dans le contrôle de la prolifération, de la survie et de l’adaptation métabolique. Pim-1 s’intègre aux sorties des réseaux JAK/STAT et PI3K/AKT et module la progression du cycle cellulaire ainsi que l’apoptose via la phosphorylation d’effecteurs en aval qui influencent la transcription et la stabilité des protéines. Dans les contextes hématopoïétiques et immunitaires, Pim-1 contribue au développement et à l’activation des lymphocytes, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des modèles de signalisation oncogénique, d’inflammation et de réponses au stress. *Pim1* est également étudié pour ses rôles dans la fonction mitochondriale et la sénescence cellulaire, établissant des liens mécanistiques entre la signalisation des kinases et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pim-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pim1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pim1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pim1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pim-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pim1 pour l'étude de la signalisation de Pim-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pim1 essentiels à la fonction de Pim-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pim1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pim-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Pim-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pim1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pim-1 plasmide HDR (m) et le Pim-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pim1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pim1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.