Plasmide Double Nickase (m) Pilt: sc-428717-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Pilt correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pilt Double Nickase (m) et le plasmide Pilt Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tjap1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) Pilt | sc-428717-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Tjap1** code **Pilt**, un facteur associé aux jonctions, impliqué dans l’organisation des contacts cellule–cellule des épithéliums et dans la coordination de la dynamique du cytosquelette, qui influence la formation de la barrière et l’architecture tissulaire. Pilt est associé à des processus tels que l’assemblage des jonctions serrées, le maintien de la polarité et la régulation de la perméabilité paracellulaire via l’échafaudage de complexes protéiques et des interactions de signalisation. Une perturbation de l’homéostasie jonctionnelle peut affecter la prolifération, la différenciation et la signalisation inflammatoire, faisant de **Tjap1** un locus utile pour étudier les mécanismes à l’origine des dysfonctionnements épithéliaux dans des contextes pertinents pour les maladies. L’étude de **Tjap1** soutient la cartographie fonctionnelle des voies des jonctions, des programmes de morphologie cellulaire et des réponses au stress dans des modèles murins.
Pilt Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tjap1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tjap1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tjap1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tjap1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.