PIG3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403356

Übersicht

TP53I3 kodiert PIG3, eine p53‑induzierbare Oxidoreduktase, die zu zellulären Stressantworten beiträgt, indem sie die Redoxhomöostase und die Dynamik reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) moduliert. PIG3 ist mit p53‑abhängigen Signalwegen verknüpft, die die DNA‑Schadenssignalgebung, Apoptose und die Regulation von Zellzyklus‑Checkpoints steuern, und wurde als nachgeschalteter Effektor untersucht, der Phänotypen beeinflusst, die durch oxidativen Stress getrieben sind. Eine veränderte TP53I3/PIG3‑Expression wurde mit Tumorbiologie und der Empfindlichkeit gegenüber genotoxischem Stress in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Studien zur Integrität des p53‑Netzwerks sowie zu redoxregulierter Signalübertragung in menschlichen Zellen relevant.

Das PIG3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TP53I3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TP53I3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TP53I3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIG3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TP53I3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIG3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TP53I3-Exone abzielen, die für die PIG3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TP53I3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PIG3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PIG3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TP53I3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIG3 HDR-Plasmid (h) und PIG3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TP53I3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TP53I3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.