Partículas Lentivirales de Activación (h) PIEZO2: sc-412957-LAC

PIEZO2 codifica un canal catiónico no selectivo, activado mecánicamente, que convierte la tensión de la membrana en una rápida entrada de Ca2+, modulando la mecanotransducción en neuronas sensoriales y otros tipos celulares mecanosensibles. La actividad de PIEZO2 acopla estímulos físicos a señales posteriores dependientes de calcio, influyendo en la excitabilidad neuronal, la remodelación del citoesqueleto y respuestas transcripcionales vinculadas a las vías del tacto y la propiocepción. La variación genética o la disfunción de PIEZO2 se ha asociado con alteraciones del procesamiento somatosensorial y fenotipos neuromusculares, por lo que es una diana ampliamente estudiada en biología sensorial y mecanobiología. In vitro, PIEZO2 se investiga comúnmente en modelos de corrientes evocadas mecánicamente, dinámica de señalización de calcio y programas de expresión génica mecanosensibles.

Las partículas de activación lentiviral PIEZO2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PIEZO2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PIEZO2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PIEZO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PIEZO2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PIEZO2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.