PIASy Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403125

Panoramica

PIAS4 codifica PIASy, una ligasi E3 di SUMO che modula la SUMOilazione delle proteine per ottimizzare finemente i programmi trascrizionali, le risposte al danno del DNA e la segnalazione dell’immunità innata. PIASy regola attività, localizzazione e stabilità di numerosi fattori di trascrizione e intermedi della segnalazione, collegando il controllo SUMO-dipendente a vie come NF-κB, le risposte all’interferone e le reti attivate dallo stress. Attraverso questi meccanismi, PIASy influenza la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e processi associati alla cromatina, spesso alterati nella biologia delle malattie. Un’alterazione della funzione di PIAS4/PIASy è stata studiata nel contesto della segnalazione oncogenica, della regolazione dell’infiammazione e di fenotipi di mantenimento del genoma rilevanti per la tumorigenesi e per modelli di trasformazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASy (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIAS4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIAS4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIAS4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIASy.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIAS4 per lo studio della segnalazione di PIASy, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PIAS4 critici per la funzione di PIASy
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIAS4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PIASy CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PIASy CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIAS4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PIASy Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PIASy (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIAS4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIAS4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.