PIASy Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403125-ACT

Il gene umano **PIAS4** codifica **PIASy**, una ligasi E3 della SUMO e coregolatore trascrizionale che modula la stabilità proteica, la localizzazione subcellulare e l’attività dei fattori di trascrizione tramite SUMOilazione. PIASy partecipa alla segnalazione di stress e infiammatoria regolando vie tra cui **JAK/STAT** e **NF-κB**, e contribuisce alle risposte al danno al DNA influenzando l’attività di regolatori nucleari chiave. Modellando programmi trascrizionali legati a proliferazione, apoptosi e risposte immunitarie, PIASy è stata implicata in contesti rilevanti per la segnalazione oncogenica, la disregolazione immunitaria e la stabilità del genoma. Il suo ruolo centrale nelle modifiche post-traduzionali rende **PIAS4** un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo SUMO-dipendente delle reti di segnalazione nucleari.

PIASy Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PIAS4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PIASy Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PIAS4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PIAS4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PIASy. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PIAS4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PIASy nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PIASy nelle cellule tumorali con espressione di PIAS4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.