PIASy Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403125-ACT

O PIAS4 humano codifica a PIASy, uma ligase E3 de SUMO e corregruladora transcricional que modula a estabilidade proteica, a localização subcelular e a atividade de fatores de transcrição por meio da SUMOilação. A PIASy participa da sinalização de estresse e inflamatória ao regular vias que incluem JAK/STAT e NF-κB, e contribui para as respostas a danos no DNA ao influenciar a atividade de reguladores nucleares-chave. Ao moldar programas transcricionais ligados à proliferação, apoptose e respostas imunes, a PIASy tem sido implicada em contextos relevantes para a sinalização oncogênica, a desregulação imune e a estabilidade do genoma. Seu papel central em modificações pós-traducionais torna o PIAS4 um alvo útil para estudos mecanísticos do controle, dependente de SUMO, de redes de sinalização nuclear.

PIASy O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIAS4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIASy O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIAS4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIAS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIASy. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIAS4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIASy no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIASy em células tumorais com expressão de PIAS4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.