Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
PIASx Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421655
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PIASx Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PIASx, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PIASx Antibody (D-12): sc-166494
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PIASx Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421655 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pias2 codifica PIASx, un membro della famiglia dei Protein Inhibitors of Activated STAT (PIAS), che agisce come ligasi E3 di SUMO e come coregolatore trascrizionale. PIASx modula la trascrizione dipendente dal segnale influenzando le vie di STAT, SMAD e dei recettori nucleari, e può modificare i complessi associati alla cromatina tramite la SUMOilazione delle proteine bersaglio. Attraverso queste attività, PIASx contribuisce alla regolazione della segnalazione immunitaria innata, delle risposte alle citochine e dei programmi di ciclo cellulare e differenziamento. La disregolazione della SUMOilazione mediata da PIASx e del controllo trascrizionale è stata collegata, in modelli meccanicistici di malattia, a una segnalazione infiammatoria aberrante e a reti trascrizionali oncogeniche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASx (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pias2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pias2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pias2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIASx.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pias2 per lo studio della segnalazione di PIASx, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pias2 critici per la funzione di PIASx
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pias2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PIASx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PIASx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pias2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PIASx Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PIASx (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pias2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pias2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.