Plásmido CRISPR de Activación (h) PIAS 3: sc-401406-ACT

PIAS3 (inhibidor proteico de STAT3 activado) es una ligasa E3 de SUMO que modula las respuestas transcripcionales al promover la SUMOilación de proteínas nucleares y al inhibir directamente la actividad de unión al ADN de STAT3. Mediante la regulación de la señalización JAK/STAT y un control transcripcional más amplio dependiente de SUMO sobre la actividad de los factores de transcripción, PIAS3 influye en las salidas de señalización de citocinas, la progresión del ciclo celular y los programas génicos sensibles al estrés. PIAS3 se ha vinculado a vías que gobiernan la regulación inmunitaria y la señalización oncogénica, donde con frecuencia se observan alteraciones en la actividad de STAT3 y en la dinámica de la SUMOilación. El estudio de la función de PIAS3 ayuda a aclarar cómo la modificación posraduccional y la represión transcripcional determinan estados de expresión génica en contextos asociados a la inflamación y la proliferación.

PIAS 3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PIAS 3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PIAS 3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PIAS 3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PIAS 3 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.