Plásmido CRISPR de Activación (m) PI-9: sc-423120-ACT

El gen Serpinb9 en el ratón codifica PI-9, un inhibidor intracelular de proteasas de serina que limita la actividad de la granzima B para modular la función efectora de los linfocitos citotóxicos y prevenir la apoptosis impulsada por proteasas en células presentadoras de antígeno y en células con privilegio inmunitario. Al amortiguar los eventos de corte mediados por la granzima B, PI-9 contribuye a la regulación de la activación de caspasas, la supervivencia de células inflamatorias y la homeostasis inmunitaria durante las interacciones citotóxicas célula a célula. La expresión de Serpinb9 se vincula a mecanismos de evasión inmunitaria y persistencia en microambientes inflamatorios, lo que la hace relevante para estudios de inmunobiología tumoral, autoinmunidad y biología del trasplante. Su regulación inducible también se relaciona con programas transcripcionales sensibles al estrés y a citocinas que moldean la diferenciación de células inmunitarias y la tolerancia inmunitaria específica de tejido.

PI-9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Serpinb9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PI-9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Serpinb9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Serpinb9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PI-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Serpinb9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PI-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PI-9 en células tumorales con expresión de Serpinb9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.