PI 4-kinase α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406508
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PI 4-kinase α El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PI 4-kinase α, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PI 4-kinase α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406508 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PI4KA codifica la fosfatidilinositol 4-quinasa alfa (PI 4-quinasa α), una quinasa de lípidos que genera fosfatidilinositol 4-fosfato (PI4P), un precursor clave de los fosfoinosítidos que organizan la identidad de las membranas y la señalización. La PI 4-quinasa α sostiene los reservorios de PI4P en el aparato de Golgi y en la membrana plasmática, influyendo en el tráfico vesicular, la transducción de señales dependiente de fosfoinosítidos y la dinámica del citoesqueleto. A través de su impacto en la homeostasis de los lípidos de membrana, PI4KA es relevante para estudios de respuestas al estrés celular y de remodelación de compartimentos del sistema endomembranoso, y el metabolismo alterado de los fosfoinosítidos se ha asociado con diversos mecanismos de enfermedad humana, incluidos procesos del neurodesarrollo y oncogénicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PI4KA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PI4KA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PI4KA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PI 4-kinase α.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PI4KA para la investigación de la señalización de PI 4-kinase α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PI4KA críticos para la función de PI 4-kinase α
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PI4KA para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PI4KA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PI 4-kinase α (h) y el plásmido HDR PI 4-kinase α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PI4KA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PI4KA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.