PI 3-kinase p85α Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422233-ACT

Pik3r1 codifica a subunidade reguladora p85α da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) de classe IA, que estabiliza e recruta subunidades catalíticas p110 para receptores tirosina-quinase ativados e proteínas adaptadoras. Ao controlar a produção de PI(3,4,5)P3, a PI3-quinase p85α modula a sinalização AKT/mTOR para regular o crescimento celular, o metabolismo, a sobrevivência e a sinalização do receptor de insulina. Em modelos murinos, alterações na atividade de Pik3r1 influenciam o desenvolvimento e a função de células imunes, a homeostase da glicose e as respostas à estimulação por fatores de crescimento. A sinalização desregulada da via PI3K está amplamente implicada em processos oncogênicos e em mecanismos de doenças metabólicas, tornando Pik3r1 um nó-chave para a investigação da via.

PI 3-kinase p85α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pik3r1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI 3-kinase p85α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pik3r1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pik3r1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI 3-kinase p85α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pik3r1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI 3-kinase p85α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI 3-kinase p85α em células tumorais com expressão de Pik3r1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.