Partículas Lentivirales de Activación (h) PI 3-kinase p55γ: sc-402964-LAC

PIK3R3 codifica la subunidad reguladora p55γ de la fosfoinosítido 3-quinasa (PI3K) de clase IA, que acopla receptores tirosina quinasa activados y proteínas adaptadoras con las isoformas catalíticas p110. Mediante la modulación de la producción de PI(3,4,5)P3, la señalización de PI3K coordina la actividad de la vía AKT–mTOR, influyendo en el crecimiento celular, la supervivencia, el metabolismo y la dinámica del citoesqueleto. La regulación alterada de componentes de la vía PI3K se asocia con frecuencia a señalización oncogénica, proliferación aberrante y resistencia al estrés celular, lo que convierte a PIK3R3 en un nodo relevante para el análisis de la vía. En contextos inmunitarios y epiteliales, las salidas de PI3K dependientes de p55γ también pueden modelar la motilidad y el crosstalk de señalización que repercuten en programas microambientales inflamatorios y asociados a tumores.

Las partículas de activación lentiviral PI 3-kinase p55γ (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PIK3R3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PI 3-kinase p55γ (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PIK3R3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PI 3-kinase p55γ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PIK3R3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.