PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432531

Übersicht

Pik3c3 kodiert die katalytische Untereinheit der Phosphatidylinositol-3-Kinase der Klasse III (häufig als PI-3-Kinase p100/Vps34 bezeichnet), die Phosphatidylinositol-3-phosphat erzeugt und damit die Identität und den Transport endosomaler Membranen steuert. In Mauszellen ist die PI3P-Produktion durch diese Kinase zentral für die Einleitung der Autophagie, die Reifung von Endosomen zu Lysosomen und die vesikuläre Sortierung über Komplexe mit regulatorischen Partnern wie VPS15 und Beclin 1. Die Aktivität von Pik3c3 integriert Nährstoff- und Stresssignale, um die lysosomale Homöostase und die zelluläre Qualitätskontrolle zu koordinieren, und beeinflusst dabei Prozesse wie Proteostase, mitochondrialen Umsatz und Immunsignalisierung. Fehlregulierte endolysosomale und autophagische Signalwege, die mit der Funktion von Pik3c3 verknüpft sind, werden häufig im Kontext von Neurodegeneration, Infektionsbiologie und Tumorzellmetabolismus untersucht.

Das PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pik3c3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pik3c3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pik3c3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PI 3-kinase p100-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pik3c3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PI 3-kinase p100-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pik3c3-Exone abzielen, die für die PI 3-kinase p100-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pik3c3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pik3c3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PI 3-kinase p100 HDR-Plasmid (m) und PI 3-kinase p100 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pik3c3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pik3c3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.