PI 3-kinase p100 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432531

Descripción general

Pik3c3 codifica la subunidad catalítica de la fosfatidilinositol 3‑quinasa de clase III (a menudo denominada PI 3‑quinasa p100/Vps34), que genera fosfatidilinositol 3‑fosfato para controlar la identidad y el tráfico de las membranas endosomales. En células de ratón, la producción de PI3P por esta quinasa es fundamental para el inicio de la autofagia, la maduración de endosoma a lisosoma y la clasificación vesicular a través de complejos con socios reguladores como VPS15 y Beclin 1. La actividad de Pik3c3 integra señales de nutrientes y de estrés para coordinar la homeostasis lisosomal y el control de calidad celular, influyendo en procesos como la proteostasis, el recambio mitocondrial y la señalización inmunitaria. Las vías endolisosomales y de autofagia desreguladas vinculadas a la función de Pik3c3 se estudian con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración, la biología de las infecciones y el metabolismo de células tumorales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p100 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pik3c3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pik3c3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pik3c3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PI 3-kinase p100.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pik3c3 para la investigación de la señalización de PI 3-kinase p100, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pik3c3 críticos para la función de PI 3-kinase p100
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pik3c3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pik3c3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PI 3-kinase p100 (m) y el plásmido HDR PI 3-kinase p100 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pik3c3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pik3c3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.