Plasmide CRISPR d'Activation (h) PI 3-kinase C2α: sc-402567-ACT

PIK3C2A code la phosphatidylinositol-4-phosphate 3-kinase C2α (PI 3-kinase C2α), une kinase lipidique de classe II qui génère des signaux phosphoinositidiques essentiels au trafic membranaire et à la production de PI3P spécifique de compartiments. En régulant l’endocytose, la dynamique associée à la clathrine et la maturation des vésicules, la PI 3-kinase C2α influence le renouvellement des récepteurs, la détection des nutriments et le flux de signalisation en aval dans des voies qui recoupent le comportement du réseau PI3K/AKT. Son activité a été reliée à l’organisation du cytosquelette et aux réponses au stress cellulaire, reliant le métabolisme des phosphoinositides à des phénotypes de prolifération et de migration. Une signalisation phosphoinositidique dérégulée impliquant PIK3C2A a été étudiée dans des contextes incluant le remodelage de voies oncogéniques ainsi que d’autres troubles où des altérations du trafic et de la réactivité aux facteurs de croissance contribuent à des états cellulaires pertinents pour la maladie.

PI 3-kinase C2α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIK3C2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PI 3-kinase C2α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIK3C2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIK3C2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PI 3-kinase C2α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIK3C2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PI 3-kinase C2α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PI 3-kinase C2α dans les cellules tumorales présentant une expression de PIK3C2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.