Plásmido CRISPR de Activación (h) PI 3-kinase C2α: sc-402567-ACT

PIK3C2A codifica la fosfatidilinositol-4-fosfato 3-quinasa C2α (PI 3-quinasa C2α), una quinasa lipídica de clase II que genera señales de fosfoinosítidos fundamentales para el tráfico de membranas y la producción de PI3P específica de compartimento. Mediante la regulación de la endocitosis, la dinámica asociada a clatrina y la maduración de vesículas, la PI 3-quinasa C2α influye en el recambio de receptores, la detección de nutrientes y el flujo de señalización aguas abajo en vías que convergen con el comportamiento de la red PI3K/AKT. Su actividad se ha relacionado con la organización del citoesqueleto y las respuestas al estrés celular, conectando el metabolismo de fosfoinosítidos con fenotipos de proliferación y migración. La señalización de fosfoinosítidos desregulada en la que participa PIK3C2A se ha investigado en contextos que incluyen la reprogramación de vías oncogénicas y otros trastornos en los que el tráfico alterado y la respuesta a factores de crecimiento contribuyen a estados celulares relevantes para la enfermedad.

PI 3-kinase C2α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PIK3C2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PI 3-kinase C2α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PIK3C2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PIK3C2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PI 3-kinase C2α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PIK3C2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PI 3-kinase C2α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PI 3-kinase C2α en células tumorales con expresión de PIK3C2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.