PHIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407159

Übersicht

PHIP (pleckstrin homology domain interacting protein) kodiert ein nukleäres und zytoplasmatisches Scaffold-Protein, das mit der Signalübertragung über Insulinrezeptor-Substrate sowie mit chromatinassoziierten Komplexen interagiert, um Transkriptionsprogramme und die Regulation von Zellzuständen zu beeinflussen. Über Interaktionen, die mit der PI3K–AKT-Signalkaskade und der Kontrolle der Genexpression verknüpft sind, trägt PHIP zur Steuerung von Zellwachstum, metabolischen Antworten und der Progression des Zellzyklus bei. Genetische Veränderungen oder eine dysregulierte Expression von PHIP wurden in mehreren Krebsarten beschrieben und im Hinblick auf Zusammenhänge mit Tumorzellproliferation, Invasion und Therapieansprechen untersucht. Darüber hinaus wurde PHIP mit neuroentwicklungsbezogenen Störungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Signalwege unterstreicht, die Signaleingänge mit transkriptionellen Ausgängen koppeln.

Das PHIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PHIP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PHIP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PHIP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PHIP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PHIP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PHIP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PHIP-Exone abzielen, die für die PHIP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PHIP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PHIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PHIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PHIP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PHIP HDR-Plasmid (h) und PHIP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PHIP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PHIP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.