Partículas Lentivirales de Activación (h) PHF5A: sc-407986-LAC

PHF5A codifica la proteína de dedo PHD 5A, un componente esencial de la subcomplejo SF3b dentro de la ribonucleoproteína nuclear pequeña U2, que contribuye al empalme (splicing) del pre-ARNm y al ensamblaje del espliceosoma. Al ayudar a definir el reconocimiento del sitio de empalme 3′, PHF5A influye en decisiones de empalme alternativo que se acoplan al control transcripcional, la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN. La alteración del empalme dependiente de PHF5A puede remodelar el panorama de isoformas de transcritos y modificar la expresión de genes implicados en la proliferación y el mantenimiento del genoma. La disfunción del espliceosoma y la selección de sitios de empalme desreguladas se asocian con frecuencia a la biología del cáncer y a otros trastornos con procesamiento aberrante del ARN, lo que convierte a PHF5A en un nodo relevante para estudios mecanísticos.

Las partículas de activación lentiviral PHF5A (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PHF5A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PHF5A (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PHF5A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PHF5A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PHF5A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.