Plásmido Doble Nickase (h) PHF5A: sc-407986-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PHF5A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PHF5A (h) y el plásmido de doble nickasa PHF5A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PHF5A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PHF5A | sc-407986-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PHF5A | sc-407986-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHF5A (proteína con dedo PHD 5A) es un componente conservado evolutivamente del subcomplejo SF3b de la snRNP U2, y actúa como un adaptador clave en el empalme del pre-ARNm y en el reconocimiento de los sitios de empalme durante las etapas tempranas del ensamblaje del espliceosoma. Al estabilizar las interacciones en la región del punto de ramificación, PHF5A favorece la eliminación precisa de intrones e influye en programas de empalme alternativo que moldean la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y los estados de diferenciación. La disfunción del espliceosoma y las dependencias de factores de empalme son características recurrentes de sistemas celulares proliferativos y adaptados al estrés, lo que convierte a PHF5A en un nodo útil para analizar el control del procesamiento de ARN. La perturbación de PHF5A se ha asociado con cambios en el equilibrio de isoformas de transcritos y con la remodelación de vías downstream, relevante para modelos de inestabilidad genómica y señalización oncogénica.
PHF5A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PHF5A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PHF5A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PHF5A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PHF5A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.