phapi2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422189

Descripción general

El gen **Pemt** de ratón codifica la fosfatidiletanolamina N-metiltransferasa, una enzima clave en la biosíntesis de fosfatidilcolina que cataliza la metilación secuencial de la fosfatidiletanolamina utilizando S-adenosilmetionina. Esta actividad mantiene la homeostasis de los fosfolípidos de membrana, el ensamblaje de lipoproteínas y el metabolismo de donadores de metilo, vinculando a PEMT con la remodelación lipídica y las respuestas celulares al estrés. La producción de fosfatidilcolina dependiente de Pemt es particularmente relevante para el manejo hepático de lípidos, la función del retículo endoplásmico (RE) y los procesos de señalización que dependen de la composición de la membrana. La alteración de las vías mediadas por PEMT se ha asociado con fenotipos de metabolismo lipídico modificados y ofrece un modelo manejable para estudiar mecanismos metabólicos y asociados a membranas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO phapi2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pemt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pemt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pemt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína phapi2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pemt para la investigación de la señalización de phapi2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pemt críticos para la función de phapi2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pemt para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido phapi2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido phapi2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pemt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR phapi2 (m) y el plásmido HDR phapi2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pemt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pemt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.