Plasmide Double Nickase (h) PGRMC1: sc-401945-NIC

Le composant membranaire 1 du récepteur de la progestérone (PGRMC1) est une protéine membranaire associée aux membranes et capable de lier l’hème, impliquée dans la signalisation non classique de la progestérone, le métabolisme des stérols et la régulation de l’activité des enzymes du cytochrome P450. Elle se localise principalement au réticulum endoplasmique et dans d’autres compartiments membranaires, où elle influence l’homéostasie lipidique, le trafic vésiculaire et les réponses au stress cellulaire, notamment des voies liées à la prolifération et à la survie. PGRMC1 a été associée à la biologie de la reproduction et à la régulation métabolique, et des profils d’expression altérés ont été rapportés dans plusieurs contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des processus neurodégénératifs. Ces caractéristiques font de PGRMC1 une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation membranaire de la progestérone, de la biologie rédox/de l’hème et des réseaux métaboliques centrés sur les P450.

PGRMC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PGRMC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PGRMC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PGRMC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PGRMC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.