Plásmido CRISPR de Activación (h) PGDH: sc-402622-ACT

El gen humano **HPGD** codifica la **15-hidroxiprostaglandina deshidrogenasa (PGDH)**, la enzima limitante de la velocidad responsable de la oxidación e inactivación dependiente de **NAD+** de prostaglandinas bioactivas como **PGE2**. Al controlar el recambio de prostanoides, la PGDH modula las salidas de señalización de **prostaglandinas/COX** que influyen en la inflamación, la homeostasis epitelial, las señales angiogénicas y la remodelación tisular. Las alteraciones en la actividad de HPGD modifican el equilibrio local de eicosanoides y se estudian con frecuencia en contextos en los que una regulación anómala del metabolismo de las prostaglandinas contribuye a una señalización inmune aberrante y a fenotipos proliferativos. Como guardián del catabolismo de las prostaglandinas, HPGD es un nodo útil para analizar la interacción cruzada entre mediadores inflamatorios, el estado metabólico y los programas transcripcionales.

PGDH El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HPGD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGDH El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HPGD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HPGD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGDH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HPGD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGDH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGDH en células tumorales con expresión de HPGD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.