Particules Lentivirales d'Activation (h) PGC1a: sc-400070-LAC

PPARGC1A code le coactivateur transcriptionnel PGC1a, un régulateur central de la biogenèse mitochondriale et du métabolisme oxydatif, qui coordonne les facteurs respiratoires nucléaires, la signalisation des PPAR et les programmes de gènes antioxydants. PGC1a intègre des signaux issus d’AMPK et de SIRT1 pour remodeler l’utilisation de l’énergie, favoriser l’oxydation des acides gras et ajuster, de manière dépendante du type cellulaire, les réseaux transcriptionnels gluconéogéniques et thermogéniques. Une activité altérée de PPARGC1A a été associée à une dysrégulation métabolique, à un dysfonctionnement mitochondrial et à des réponses au stress pertinentes pour la résistance à l’insuline, la neurodégénérescence et des phénotypes cardiométaboliques. Dans des modèles de cellules humaines, PPARGC1A est fréquemment étudié afin d’analyser le contrôle transcriptionnel de la respiration, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et les réponses adaptatives aux signaux liés aux nutriments et à l’exercice.

Les particules d'activation lentivirales PGC1a (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PPARGC1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PGC1a (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PPARGC1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PGC1a. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PPARGC1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.