Plásmido CRISPR de Activación (m) PGC1a: sc-422364-ACT

Ppargc1a codifica el coactivador transcripcional PGC1a, un regulador central de la biogénesis mitocondrial y del metabolismo oxidativo en tejidos de ratón con alta demanda energética. PGC1a coordina programas de receptores nucleares y factores de transcripción, incluidas las vías de señalización de PPAR, NRF1/2 y ERR, para ajustar la oxidación de ácidos grasos, la fosforilación oxidativa y las defensas antioxidantes. Su actividad integra señales de nutrientes y de estrés a través de rutas como AMPK y la desacetilación dependiente de sirtuinas, configurando la flexibilidad metabólica y el equilibrio redox celular. La expresión desregulada de Ppargc1a se ha vinculado con fenotipos del síndrome metabólico, el remodelado muscular y cardíaco, y la disfunción mitocondrial asociada a la neurodegeneración, lo que la convierte en una diana frecuente en estudios mecanísticos de la homeostasis energética.

PGC1a El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ppargc1a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGC1a El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ppargc1a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ppargc1a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGC1a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ppargc1a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGC1a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGC1a en células tumorales con expresión de Ppargc1a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.