Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKL (h): sc-402662
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PFKL Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PFKL, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PFKL Antibody (A-6): sc-393713
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKL (h) | sc-402662 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PFKL code l’isoforme hépatique de la phosphofructokinase‑1 (PFK‑1), une enzyme clé limitante de la glycolyse qui catalyse la conversion du fructose‑6‑phosphate en fructose‑1,6‑bisphosphate. En intégrant des signaux allostériques liés à l’état énergétique cellulaire et au statut des métabolites, PFKL contribue à coordonner le flux glycolytique avec les besoins biosynthétiques et l’équilibre rédox. Des altérations de l’activité et de l’expression de PFKL ont été associées à une reprogrammation métabolique dans des états prolifératifs, entraînant des changements dans l’utilisation du glucose, la production de lactate et l’orientation du carbone vers des voies en aval. En tant que nœud central de la glycolyse, PFKL est fréquemment étudié dans les travaux portant sur l’homéostasie énergétique, l’adaptation au stress et les dépendances métaboliques pertinentes pour des phénotypes associés aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKL (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PFKL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PFKL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PFKL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PFKL.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PFKL pour l'étude de la signalisation de PFKL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PFKL essentiels à la fonction de PFKL
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PFKL pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PFKL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PFKL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PFKL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PFKL plasmide HDR (h) et le PFKL (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PFKL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PFKL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.