PFK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401023

Visão geral

PFKM codifica a isoforma muscular da fosfofrutoquinase-1 (PFK-1), uma enzima limitante da glicólise que catalisa a conversão dependente de ATP de frutose-6-fosfato em frutose-1,6-bisfosfato. Como um ponto-chave de controle do fluxo glicolítico, a PFK-1 integra a regulação alostérica pelo estado energético celular e por metabólitos, coordenando a utilização de glicose com a demanda de ATP. A atividade de PFKM influencia o metabolismo central do carbono, a produção de lactato e vias biossintéticas a jusante, associadas a programas proliferativos e de adaptação ao estresse. A alteração genética de PFKM está ligada à doença de armazenamento de glicogênio tipo VII (doença de Tarui) e é utilizada para investigar como mudanças na glicólise contribuem para disfunção metabólica e fenótipos celulares relevantes para a biologia neuromuscular e hematológica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PFK-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PFKM em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PFKM, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PFKM na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PFK-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PFKM para a investigação da sinalização de PFK-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PFKM críticos para a função PFK-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PFKM para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PFK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PFK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PFKM. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PFK-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PFK-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PFKM para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PFKM definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.