Plásmido CRISPR de Activación (h) Pez: sc-402896-ACT

PTPN14 codifica la proteína tirosina fosfatasa no receptora tipo 14 (Pez), una fosfatasa citoplasmática que integra señales que controlan la adhesión celular, la polaridad y el crecimiento dependiente del contacto. Pez participa en vías que convergen en la regulación transcripcional Hippo–YAP/TAZ y coordina la remodelación del citoesqueleto de actina mediante interacciones en las uniones célula–célula y en complejos de adhesión focal. Al modular redes de señalización dependientes de fosforilación, PTPN14 influye en la organización epitelial, la migración y la mecanotransducción. La actividad o expresión alteradas de PTPN14 se han vinculado con proliferación desregulada y fenotipos invasivos en múltiples contextos relacionados con el cáncer, lo que la hace relevante para estudios de señalización supresora de tumores y homeostasis de las uniones celulares.

Pez El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPN14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pez El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPN14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPN14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pez. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPN14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pez en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pez en células tumorales con expresión de PTPN14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.