Plásmido Doble Nickase (h) Peroxin 14: sc-405075-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Peroxin 14 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Peroxin 14 (h) y el plásmido de doble nickasa Peroxin 14 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PEX14. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Peroxin 14 Anticuerpo (1G12): sc-293383
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Peroxin 14 | sc-405075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Peroxin 14 | sc-405075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PEX14 codifica la peroxina 14, un componente integral de la membrana peroxisomal que actúa como factor de anclaje para los complejos receptores PEX5 y PEX7 durante la importación de enzimas de la matriz que portan señales de direccionamiento PTS1 y PTS2. A través de esta función, PEX14 es fundamental para la biogénesis del peroxisoma, el mantenimiento de la proteostasis del orgánulo y vías metabólicas como la β‑oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga y la homeostasis redox celular. La alteración de la importación dependiente de PEX14 perturba el metabolismo peroxisomal y puede afectar de forma secundaria la función mitocondrial, la señalización lipídica y el manejo de especies reactivas de oxígeno. La desregulación del ensamblaje del peroxisoma y de la maquinaria de importación está implicada en trastornos de la biogénesis peroxisomal y en mecanismos más amplios relevantes para el neurodesarrollo y la disfunción metabólica.
Peroxin 14 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PEX14 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PEX14. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PEX14. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PEX14 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.