Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) PERK: sc-420142-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)PERK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PERK (m) y el plásmido de doble nickasa PERK (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Eif2ak3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PERK Anticuerpo (B-5): sc-377400
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) PERK | sc-420142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) PERK | sc-420142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Eif2ak3 del ratón codifica PERK, una cinasa sensora del estrés del retículo endoplásmico (RE) que inicia la respuesta a proteínas mal plegadas al fosforilar eIF2α, reduciendo la traducción global y, al mismo tiempo, promoviendo programas transcripcionales adaptativos como la señalización dependiente de ATF4. PERK integra la proteostasis con el control redox, la autofagia y las decisiones de apoptosis durante el estrés sostenido, influyendo en la función de células secretoras y en las respuestas inflamatorias. La desregulación de la señalización de PERK se ha implicado en afecciones caracterizadas por estrés crónico del RE, como la disfunción metabólica, la neurodegeneración y la adaptación del estrés en células tumorales, lo que convierte a Eif2ak3 en un nodo clave para estudios mecanísticos de vías sensibles al estrés.
PERK El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Eif2ak3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Eif2ak3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Eif2ak3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Eif2ak3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.