Per3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411220-ACT

Das humane Gen **PER3** kodiert die zirkadiane Uhrkomponente Per3, einen PAS-Domänen-haltigen Regulator, der dabei hilft, transkriptionell-translationelle Rückkopplungsschleifen zu koordinieren, welche 24-Stunden-Rhythmen steuern. PER3 interagiert mit der zentralen Uhrenmaschinerie (einschließlich PER/CRY-Komplexen und der durch CLOCK:BMAL1 angetriebenen Transkription), um rhythmische Genexpressionsprogramme zu modulieren, die den Zeitpunkt des Zellzyklus, den Stoffwechsel, die Hormonsignalgebung und die neuronale Physiologie beeinflussen. Eine veränderte PER3-Funktion oder -Expression ist mit Phänotypen der zirkadianen Fehlanpassung verbunden, etwa Variationen im Schlaf-Wach-Timing, und wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen eine Störung der Uhr mit neuropsychiatrischen Merkmalen und kardiometabolischem Risiko korreliert. PER3 ist daher ein nützliches Ziel, um die Regulation zirkadianer Signalwege, Mechanismen der Phasenverschiebung und nachgeschaltete oszillierende Transkriptome in humanen Zellmodellen zu analysieren.

Per3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PER3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Per3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PER3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PER3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Per3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PER3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Per3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Per3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PER3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.