PEPT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404322-ACT

SLC15A2 codifica o PEPT2, um transportador de oligopéptidos acoplado a prótons, de alta afinidade, da família dos transportadores de solutos, que medeia a captação e a reabsorção de di- e tripeptídeos, bem como de metabolitos semelhantes a peptídeos. O PEPT2 contribui para a deteção celular de nutrientes e para a homeostase de aminoácidos ao ligar gradientes transmembranares de H+ ao transporte de peptídeos, com papéis de destaque em processos de transporte epitelial e no metabolismo associado a barreiras. Pelo processamento de substratos peptídicos e compostos peptidomiméticos, o PEPT2 é relevante para a investigação em farmacocinética e toxicologia, particularmente em tecidos em que a expressão do transportador pode moldar os perfis de exposição intracelular. Alterações na atividade de SLC15A2 têm sido investigadas em contextos de disfunção renal e epitelial e em estudos sobre suscetibilidade a stress xenobiótico mediada por transportadores.

PEPT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC15A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PEPT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC15A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC15A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PEPT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC15A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PEPT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PEPT2 em células tumorais com expressão de SLC15A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.