Plásmido Doble Nickase (h) PEPT1: sc-401259-NIC

SLC15A1 codifica PEPT1, un transportador de oligopéptidos acoplado a protones que media la captación de di- y tripéptidos y de xenobióticos con estructura similar a péptidos a través de la membrana apical de las células epiteliales, especialmente en el intestino delgado. PEPT1 favorece la absorción de nutrientes y la homeostasis celular del nitrógeno al acoplar el transporte del sustrato al gradiente transmembrana de H+, integrándose con la utilización de aminoácidos y los programas metabólicos del epitelio. Su actividad influye en la fisiología de la barrera intestinal y en la diferenciación epitelial, y se han descrito alteraciones en la expresión de SLC15A1 en contextos inflamatorios y metabólicos que afectan el manejo de nutrientes regulado por este transportador. Dado que PEPT1 también transporta compuestos que imitan a los péptidos, SLC15A1 sirve como modelo para estudiar la regulación de los transportadores de la familia SLC, la cinética del transporte de membrana y las respuestas del epitelio al estrés.

PEPT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC15A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC15A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC15A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC15A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.