Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PEPT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401259
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PEPT1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PEPT1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PEPT1 Antibody (E-3): sc-373742
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PEPT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401259 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SLC15A1 codifica PEPT1, un trasportatore apicale di oligopeptidi accoppiato ai protoni che media l’assorbimento di di- e tripeptidi alimentari e di un’ampia gamma di substrati simili a peptidi attraverso le barriere epiteliali. L’attività di PEPT1 integra i gradienti transmembrana di H+ con l’assorbimento dei nutrienti, collegando il trasporto intestinale alla disponibilità cellulare di aminoacidi e ai processi metabolici e di risposta allo stress a valle. L’espressione è massima nell’intestino tenue e può essere indotta in altri epiteli in condizioni di perturbazione infiammatoria o metabolica, influenzando il flusso dei substrati nei tessuti di barriera. La disregolazione della funzione di SLC15A1/PEPT1 è stata studiata in contesti che includono infiammazione intestinale, fenotipi di malassorbimento e alterata gestione di composti peptidomimetici rilevanti per la ricerca in farmacologia e tossicologia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PEPT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC15A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC15A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC15A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PEPT1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC15A1 per lo studio della segnalazione di PEPT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SLC15A1 critici per la funzione di PEPT1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC15A1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PEPT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PEPT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC15A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PEPT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PEPT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC15A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC15A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.