Pepsin A4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418415

Descripción general

PGA4 codifica la pepsina A4, una endopeptidasa aspártica producida como un zimógeno secretado en la mucosa gástrica y activada en condiciones ácidas para escindir proteínas de la dieta y endógenas. Como miembro de la familia de las pepsinas, la pepsina A4 contribuye a la proteostasis gastrointestinal, influyendo en la generación de péptidos, la digestión luminal de proteínas y la disponibilidad posterior de antígenos y nutrientes. Su actividad está integrada con la biología del ácido gástrico y los procesos de la barrera mucosa, y la expresión alterada o el desequilibrio de proteasas se evalúa con frecuencia en estudios de remodelación del epitelio gástrico y de patología asociada a la inflamación. Por lo tanto, PGA4 es relevante para desentrañar vías dependientes de proteasas en el estómago y para investigaciones orientadas a biomarcadores en contextos de enfermedad gástrica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pepsin A4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PGA4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PGA4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PGA4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pepsin A4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PGA4 para la investigación de la señalización de Pepsin A4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PGA4 críticos para la función de Pepsin A4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PGA4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PGA4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pepsin A4 (h) y el plásmido HDR Pepsin A4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PGA4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PGA4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.